بررسی اثرات زهر زنبور عسل بر بیان آکواپورینهای یک و چهار در سلولهای اپی تلیالی شبکه کوروئید بطنهای جانبی مغز موشهای صحرایی در محیط کشت

آکواپورینها دسته ای از پروتئینهای تراغشایی (اینتگرال) ایجاد کننده کانال های آبی در غشای سلولها هستند که موجب انتقال آب به صورت دو طرفه در دو سوی غشای پلاسمایی میشوند. تاکنون ?? نوع مختلف از این کانالهای آبی در پستانداران شناسایی شده است. ازاین میان آکواپورینهای ?،?،?و?? درسیستم اعصاب مرکزی بیان میشوند. آکواپورین ?، در غشای راسی سلولهای اپی تلیالی شبکه کوروئید بیان شده و نقشی اساسی در تولید مایع مغزی – نخاعی دارد. آکواپورین چهار نیز به صورت ترانسکریپت در سیتوپلاسم این سلولها دیده شده و به نظر میرسد در نقل و انتقال آب در اجزای درون سلولی نقش داشته باشد. بیان این دو آکواپورین معمولا در حالات پاتولوژی دستگاه عصبی مرکزی تغییر میکند. به نظر میرسد استفاده از مهارکننده های بیان آکواپورین یک و فعال کنندگان بیان آکواپورین ?، میتوانند به عنوان عوامل جلوگیری کننده از اِدم و رفع اِدم مفید واقع گردند. زهر زنبور عسل با دارابودن خواص ضد التهابی در بهبود بسیاری از حالات بیماری مانند اگزما، آرتریت، میگرن، مالتیپل اسکلروزیس، پارکینسون، سردرد، التهاب عنکبوتیه و. . . مورد استفاده قرار میگیرد. از آنجایی که معمولا التهاب و اِدم با یکدیگر همراه هستند به نظر میرسد تنظیم نقل و انتقال آب از طریق کانال آبی آکواپورین و تنظیم بیان انها نقش مهمی در کنترل التهاب داشته باشد. بنابراین هدف از این تجربه سنجش احتمال استفاده از زهر زنبور عسل به عنوان ماده ای ضد التهابی در رفع حالات اِدمی دستگاه عصبی مرکزی، از طریق تنظیم بیان آکواپورینهای ?و? در بافت ترشح کننده قسمت اعظم مایع مغزی – نخاعی یعنی سلولهای اپی تلیالی شبکه کوروئید است. برای دستیابی به این هدف از کشت اولیه سلولهای اپی تلیالی شبکه کوروئید استفاده شد. هر بارمغز تعداد? تا ? عدد موش صحرایی نژاد ویستار از هر دوجنس با سن تقریبی ? تا ? هفته خارج شده، بافت شبکه کوروئید از بطنهای جانبی آن خارج شده و پس از شستشو در محلول فسفات بافر سالین همراه با آنتی بیوتیکهای پنی سیلین – استرپتومایسین?/??، پس از هضم آنزیمی و مکانیکی سلولهای جدا شده در پلیتهای پوشش داده شده با ژلاتین ?/?? در محیط کشت پایه dmem همراه با افزودنی های : فاکتور رشد اپی تلیالی (egf)، سیتوزین آرابینوزید (ca)و پنی سیلین – استرپتومایسین و ??? سرم جنین گوساله(fbs) کشت داده میشوند. سیتوزین آرابینوزید جهت جلوگیری از رشد سلولهای استطاله دار تنها در سه روز اول کشت به محیط اضافه میگردند. پس از رسیدن سلولها به حد مناسب رشد تیمار با غلظتهای(µg)/ml?/?، ?/?، ?، ?? و ??زهر زنبور عسل جهت تست mtt و تعیین ic50 انجام شد. ic50 به دست آمده(µg)/ml?/? بود. سپس تیمارسلولی با غلظتهای مختلف زیرغلظت ic50 وتستهای مولکولی ایمنوسیتوشیمی و فلوسیتومتری انجام گردید. فعال شدن پروتئین کیناز c و التهاب در بسیاری موارد همراه با یکدیگر اتفاق می افتند. زهر زنبور عسل با دارا بودن ترکیبی به نام ملیتین قدرت مهار این پروتئین کیناز و کاهش التهاب را دارد. تنظیم نفوذپذیری وبیان کانالهای پروتئینی آکواپورین ?و? از طریق پروتئین کیناز cانجام میگردد. به این صورت که فعال کنندگان این پروتئین کیناز موجب افزایش نفوذپذیری و بیان پروتئین آکواپورین ?و کاهش نفوذپذیری و بیان پروتئین آکواپورین ? میگردد. بنابراین به نظر میرسد کاهش بیان آکواپورین ?و افزایش بیان آکواپورین ?، در اثر تیمار سلولهای اپی تلیالی شبکه کوروئید با زهر زنبور عسل در تجربه ما در اثر مهار این پروتئین کیناز باشد.